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    2016年ELISA試劑盒選購需要掌握的方法

    發(fā)布時(shí)間: 2016-10-28  點(diǎn)擊次數(shù): 971次

    ELISA試劑盒有著準(zhǔn)確性高、活絡(luò)度高、特異性強(qiáng)的諸多長(zhǎng)處,在試驗(yàn)室的運(yùn)用現(xiàn)已相當(dāng)遍及,絕大多數(shù)是用于檢查不知道樣本中抗原的濃度。如今市面上的ELISA試劑盒既有國產(chǎn)也有進(jìn)口,數(shù)量繁復(fù)令人眼花繚亂,并且質(zhì)量也是良莠不齊,那么咱們?cè)鯓硬拍苓x出zui適用的產(chǎn)品呢?首要要依據(jù)咱們所要檢查的分子進(jìn)行檢查,除此以外也還有一些需求加以考量的要素,下面就為咱們供給幾點(diǎn)參閱。
    1. 試驗(yàn)類型
    ELISA試劑盒有多種類型,不過它們都有一個(gè)一起特點(diǎn),即是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲方法包含將抗原吸附到微孔板或許用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。In-cell ELISA和酶聯(lián)免疫斑駁ELISPOT是兩種格外的類型,In-cell ELISA需求將微孔板中培育的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化,然后再用抗體原位檢查。ELISPOT有點(diǎn)像蛋白印跡Western blot,先在帶膜的微孔板中培育細(xì)胞,ELISA試劑盒然后在膜上檢查細(xì)胞排泄的抗原構(gòu)成斑駁。此外,咱們還需求依據(jù)本身需求挑選96孔板或是384孔板進(jìn)行ELISA試驗(yàn)。
    一般大家運(yùn)用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA試驗(yàn),雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢查抗體之間,這種辦法既活絡(luò)又有用,受到了很多研究者的喜愛。不過有時(shí)候雙抗夾心法并不是挑選,例如有時(shí)候抗原格外小讓兩個(gè)大抗體難以附著,又或許抗體只要一個(gè)抗體位點(diǎn)。在上述情況下,競(jìng)賽性ELISA就更為適用,這種辦法是選用帶符號(hào)的純化抗原與樣本中無符號(hào)的抗原進(jìn)行競(jìng)賽,以捕獲抗體。

    2. 抗體類型
    單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA,實(shí)際上有時(shí)候二者作用非常好。例如,關(guān)于雙抗夾心法而言,用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行檢查有時(shí)更有協(xié)助。多抗能夠保證捕獲所有抗原,隨后單抗再特異性檢查具有特定抗原表位的抗原。
    雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體與檢查抗體(不管多抗仍是單抗)的配對(duì)很有考究。咱們不希望捕獲抗體與檢查抗體競(jìng)賽抗原上的同一位點(diǎn),為此咱們就需求保證捕獲抗體和檢查抗體所識(shí)其他抗原表位不存在堆疊。假如捕獲抗體和檢查抗體之間發(fā)生了抵觸,就會(huì)對(duì)試驗(yàn)成果發(fā)生較大影響。要防止這一疑問,咱們能夠挑選采購“matched pair"的捕獲/檢查抗體對(duì),這些打包在一起的抗體是商家經(jīng)過驗(yàn)證才引薦的好組合。

    3. 穿插反響
    假如抗體間發(fā)生抵觸或穿插反響就會(huì)影響整個(gè)試驗(yàn)的特異性。其間抗體來歷所帶來的兼容性即是穿插反響的一個(gè)要素。雖然如今采購源自動(dòng)物的抗體越來越簡(jiǎn)單,咱們?nèi)杂斜匾姓J(rèn)一下是不是會(huì)發(fā)生穿插反響的疑問。在用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA檢查時(shí),檢查用的二抗有必要特異性對(duì)于檢查一抗,而不能與捕獲抗體起反響。假如檢查用二抗與捕獲抗體,試驗(yàn)特異性就會(huì)大打折扣。一般咱們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢查一抗,來防止上述疑問。
    與此同時(shí),了解試劑盒中供給的buffer也是有必要的(例如washing buffer和blocking buffer),避免這些buffer富含也許影響抗原抗體相互作用的組分,使檢查成果收到影響。

    4. 檢查方法
    如今檢查ELISA有很多路徑,咱們能夠依據(jù)自個(gè)的偏好進(jìn)行挑選。一般ELISA檢查的是酶促反響的可溶性產(chǎn)品,抗體上有相應(yīng)的酶(例如一般運(yùn)用的辣根過氧化物酶HRP),而反響系統(tǒng)中增加有相應(yīng)的底物(如3,3-二氨基聯(lián)苯胺DAB)。這種酶促反響生成具有特征性的色彩,能夠經(jīng)過分光光度計(jì)進(jìn)行檢查,堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶能夠在一抗上,也能夠在二抗上,還能夠運(yùn)用鏈霉親和素符號(hào)的酶與親和素符號(hào)的一抗。此外ELISA的成果檢查還包含放射性檢查、熒光檢查、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢查等。
        ELISA試劑盒上述四點(diǎn)包括的疑問就現(xiàn)已很多了,假如您對(duì)考慮采購的ELISA試劑盒還有任何疑問,都能夠直接向商家咨詢。各大商家的上也有相應(yīng)的技術(shù)資料供給,能夠從中獲取有價(jià)值的產(chǎn)品信息。

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