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    PCR在臨床中的應用(三)

    發布時間: 2009-08-03  點擊次數: 3005次

     對于梅毒(TP)的診斷:敏感性、特異性均高。一般用來做確證試驗。不能用于觀察療效:即使患者經過足夠的抗梅治療,血清學反應仍可保持陽性,甚至保持終生。

      目的探討聚合酶鏈反應(PCR)反向膜雜交技術檢測臨床標本中結核分支桿菌(TB)DNA的價值.方法用PCR反向膜雜交技術檢測522例結核及60例非結核患者臨床標本中的TBDNA,同時用培養、抗酸染色涂片及常規PCR法作對照.結果PCR反向膜雜交法陽性率為80.6%(411/690),培養為18.1%(125/690),鏡檢為13.9%(96/690),常規PCR為59.6%(411/690),PCR反向膜雜交法與常規法比較(P<0.001=,差異有顯著意義.PCR反向膜雜交法陽性檢出率高于常規PCR(P>0.05),但差異無顯著意義;該技術假陽性為零.結論PCR反向膜雜交技術檢測臨床標本中TB-DNA具有快速、高度特異性和敏感性,可為結核病的臨床早期診斷提供一種新的病原學診斷手段.

       近年來聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction,PCR)技術已經用于Hp的診斷,該技術的敏感性比寡核苷酸探針增加了100倍,可以檢出少至100個Hp。目前Hp的尿素酶基因和16SrRNA基因的部分序列已經測出,為PCR特異性引物的選擇提供了依據。我們以一對與16SrRNA基因互補的寡核苷酸為引物(CP1/CP2),建立了從胃粘膜活組織標本中檢測Hp感染的PCR技術。用該方法檢測Hp標準菌株NCTC 11637,NCTC11848及50株從臨床病人胃粘膜活組織中分離的Hp菌株均產生450bp的片段,其敏感性為0.1pg的HpDNA,相當于100個細菌細胞 ,而對12株非Hp菌株(包括金葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎雙球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、變形桿菌、痢疾桿菌及空腸彎曲菌NCTC11351)以及無Hp感染的人胃粘膜細胞呈陰性反應。我們還用PCR檢測了96例因上消化道癥狀而行胃鏡檢查的患者,結果表明PCR檢查的Hp陽性率高于常規檢查法。我們還對17例經不同方案治療后用常規方法檢查(尿素酶試驗、銀染、及培養均陰性)而被認為Hp被*的病人,用PCR檢查發現4例Hp陽性。以往我們對一些常規方法未能檢出而實際上還存在Hp的病人,誤認為Hp被*而放棄治療,這些病人短期內Hp再現實際上是治療不*,這對于指導Hp感染的治療有十分重要的臨床意義。
     
       HCMV感染是器官移植受者術后常見并發癥之一。HCMV感染系全身感染,臨床表現多樣,與移植排斥反應的臨床癥狀十分相似,易于混淆,但二者的產生條件截然相反,在治療上*不同。要弄清器官移植術后受者的臨床癥狀是否由HCMV感染所致,及時診斷活動性HCMV感染非常重要。HCMV感染是影響器官或組織移植成敗的重要因素。特別在骨髓移植感染中,如不及時診治,常可引起致命危險和移植失敗。因此早期診斷和及時有效的預防性治療是降低移植術后HCMV病發生率和死亡率的關鍵。熒光定量PCR技術對HCMV DNA的檢測對感染的檢測具有臨床應用價值,因為體液中病毒DNA先于病毒感染的臨床癥狀或血清學證據的出現,可作為HCMV感染的早期指標,對于HCMV感染疾病的治療和預防具有重要的意義。由于HCMV可通過胎盤內感染、產道感染等途徑傳播,而且受感染的新生兒死亡率較高,因此利用PCR進行早期診斷及采取及時的治療措施,對優生優育也有重要意義。目前對HCMV感染疾病的治療和預防主要采用抗病毒藥物。顯然對抗病毒藥物的療效需要有有效的觀察和評價手段。熒光定量PCR對HCMV DNA可進行定量分析,檢測指標穩定,通過對DNA血癥水平的動態觀察以監測HCMV疾病的發生、發展及預后,及時調整免疫抑制劑的用量,指導抗病毒治療,觀察療效,分析是否有耐藥等,因此可作為評價各種抗病毒藥物療效的有力手段。




    附錄:
    PCR在臨床中的應用(二)
    PCR在臨床中的運用(一)

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