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    植物磷脂酸(PA)ELISA 檢測試劑盒

    發布時間: 2010/4/19  點擊次數: 1625次
    提 供 商: 研域(上海)化學試劑有限公司 資料大?。?/td>
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    相關產品:
    詳細介紹:

     

    PA ELISA試劑盒用于植物提取液PA。本試劑盒可以檢測天然和重組的PA。
    本試劑盒于科研、而非用于臨床診斷。
     
    試驗原理
    PA試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知PA濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將PA和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中PA的濃度呈比例關系。
     
    試劑盒內容及其配制

    試劑盒成份(2-8℃保存)
    96孔配置
    48孔配置
    配制
    96/48人份酶標板
    1塊板(96T)
    半塊板(48T)
    即用型
    塑料膜板蓋
    1塊
    半塊
    即用型
    標準品:40ng/ml
    1瓶(0.6ml)
    1瓶(0.3ml)
    按說明書進行稀稀
    空白對照
    1瓶(1.0ml)
    1瓶(0.5ml)
    即用型
    標準品稀釋緩沖液
    1瓶(5ml)
    1瓶(2.5ml)
    即用型
    生物素標記的抗ABA抗體
    1瓶(6ml)
    1瓶(3.0ml)
    即用型
    親和鏈酶素-HRP
    1瓶(10ml)
    1瓶(5.0ml)
    即用型
    洗滌緩沖液
    1瓶(60ml)
    1瓶(30ml)
    按說明書進行稀釋
    底物A
    1瓶(6.0ml)
    1瓶(3.0ml)
    即用型
    底物B
    1瓶(6.0ml)
    1瓶(3.0ml)
    即用型
    終止液
    1瓶(6.0ml)
    1瓶(3.0ml)
    即用型

     
    自備材料
    1. 蒸餾水。
    2. 加樣器:5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。
    3. 振蕩器及磁力攪拌器等。
     
    安全性
    1. 此試劑盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV為陰性,但沒有實驗室可*保證此血制品不會傳染肝炎、AIDS或其它傳染病,依據當地的安全條例處理本試劑盒里的成份及血清和血漿等樣品。
    2. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
    3. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
    4. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
     
     
    操作注意事項
    1. 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
    2. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
    3. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
    4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
    5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
    6. 洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
    7. 底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
    8. 加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
    9. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
     
     
    試劑的準備
    1. 標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:

    40 ng/ml
    (6號標準品)
    原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
    20 ng/ml
    (5號標準品)
    100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
    10 ng/ml
    (4號標準品)
    100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
    5.0 ng/ml
    (3號標準品)
    100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
    2.5 ng/ml
    (2號標準品)
    100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
    1.25 ng/ml
    (1號標準品)
    100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
    0 ng/ml
    (空白對照)
    原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

     
    2. 洗滌緩沖液(20×)的稀釋:蒸餾水20倍稀釋。
     
    操作步驟
    1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
    2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
    3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
    4. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作四次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
    5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
    6. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作四次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
    7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育15分鐘。避免光照。
    8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
    9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。
     
    建議使用的實驗方案

     
    標準品濃度(ng/ml)
     
    A
    40
    40
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    B
    20
    20
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    C
    10
    10
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    D
    5.0
    5.0
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    E
    2.5
    2.5
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    F
    1.25
    1.25
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    G
    0
    0
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    H
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品
    樣品

     
    結果分析
    以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的PA標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的PA含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
     
    局限
    6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。
     
    試劑盒性能
    1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
    2. 特異性:不與人其它細胞因子反應。
    3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。
     
     

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