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    雞胱天蛋白酶3(Caspase-3)Elisa試劑盒說明書

    發布時間: 2010-08-30  點擊次數: 1407次

    本產品僅供研究使用

    【試劑盒名稱】
    雞胱天蛋白酶3(Caspase-3)定量檢測試劑盒(ELISA)
    【試劑盒用途】
    定量檢測雞血清、血漿、組織及相關液體樣本中胱天蛋白酶3(Caspase-3)的含量。
    【檢測原理】
    本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)。將標準品、待測樣本加入到預先包被雞胱天蛋白酶3(Caspase-3)單克隆抗體透明酶標包被板中,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分,再加入酶標工作液,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉化為藍色產物,在酸的作用下變成,顏色的深淺與樣品中雞胱天蛋白酶3(Caspase-3)濃度呈正相關,450nm波長下測定OD值,根據標準品和樣品的OD值,計算樣本中雞胱天蛋白酶3(Caspase-3)含量。
    【試劑盒組成】
    1
     酶標包被板
     12孔×4條
     7
     顯色劑A液
     3mL
     
    2
     標準品
     0.3mL×6管
     8
     顯色劑B液
     3mL
     
    3
     20倍濃縮洗滌液
     15mL
     9
     終止液
     3mL
     
    4
     樣本稀釋液
     3mL
     10
     說明書
     1份
     
    5
     特殊稀釋液
     3mL
     11
     封板膜
     2張
     
    6
     酶標試劑
     3mL
     12
     密封袋
     1個
     

    備注:標準品(1號→6號)濃度依次為:48、24、12、6、3、1.5 pmol/L.
     
    【需要而未提供的試劑和器材】
    1、37℃恒溫箱
    2、標準規格酶標儀
    3、精密移液器及一次性吸頭
    4、蒸餾水
    5、一次性試管
    6、吸水紙
    【操作步驟】
    1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復溫平衡30分鐘。
    2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
    3、加標準品和待測樣本:取足夠數量的酶標包被板,固定于框架上,分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加。
    4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
    5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
    6、加酶標工作液:每孔加入酶標工作液50μL,空白對照孔不加。
    7、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
    8、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
    9、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,再加入顯色劑B液 50μL,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),37℃避光顯色15min。
    10、終止:取出酶標板,每孔加終止液50μL,終止反應(顏色由藍色立轉)。
    11、測定:以空白孔調零,在終止后15分鐘內,用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。
    12、計算:根據標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。
    【樣本要求】
    1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。
    2、標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
    3、樣本應充分離心,不得有溶血及顆粒。
    【注意事項】
    1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
    2、酶標包被板開封后如未用完,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
    3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。
    4、牢記樣本已經稀釋5倍,計算結果乘以5才是樣本實際濃度。
    5、本試劑盒定量范圍為1.5-48pmol/L,超過此范圍,為標準曲線延伸計算所得,不做為準確定量結果,請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果(1.5-48pmol/L范圍內),乘以總稀釋倍數即為樣本zui終濃度。
    6、若顯色過淺,可適當延長底物溫育時間。
    7、為避免交叉污染,標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復使用封板膜。
    8、試劑盒保質期內使用,不同批號的試劑不得混用。
    9、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。
     
    【操作程序總結】
     
    準備試劑,樣品和標準品
     

     

    加入準備好的樣品和標準品,37℃反應30分鐘
     
    洗板4次,加入酶標試劑,37℃反應30分鐘
     
    洗板4次,加入顯色液A、B,37℃顯色15分鐘
     
    加入終止液
     
    15分鐘之內讀OD值
     
    計算
     
    【檢測范圍】
    1.5pmol/L - 48pmol/L
    【規格】
    48人份/盒
    【貯藏】
    2-8℃,避光防潮保存。
    【有效期】
    6個月

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