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    上海研域生物操作ELISA試劑盒時,實驗室需求留意這幾點

    發布時間: 2024-02-18  點擊次數: 777次

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    實驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制實驗條件,待檢樣品應作一式二份,以確保實驗作用的準確性。有時本底較高,闡明有非特異性反應,可選用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

    ELISA試劑盒


     上海研域生物在ELISA試劑盒當中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其間包含:

    1. 固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方法可所以凹孔平板、試管、珠粒等。現在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在運用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,調查其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附功能是否良好。

    2. 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體外表時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有必定影響,一般多選用4℃18~24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它實驗條件相一同,調查陽性標本的OD值。選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度。關于多數蛋白質來說一般為1~10μg/ml。

    3. 酶符號抗體作業濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行開始效價的滴定(見酶符號抗體部份)。然后再固定其它條件或采納“方陣法"(包被物、待檢樣品的參閱品及酶符號抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統里準確地滴定其作業濃度。 

    4. 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體有潛在的致癌作用,應留意防護。有條件者應運用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是現在較為滿意的供氫體。ELISA試劑盒底物作用一段時間后,應參與強酸或強堿以停止反應。一般底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物運用液有必要新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前參與。 

     

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