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    研域解析:酶符號抗體的制備辦法

    發布時間: 2020-02-14  點擊次數: 1449次

    酶符號抗體的制備辦法主要有兩種,即戊二醛交聯法和過碘酸鹽氧化法。 
    (1)戊二醛交聯法:戊二醛是一種雙功用團試劑,它可以使酶與蛋白質的氨基通過它而聯合。堿性磷酸一般用此法進行符號。交聯辦法一步法、兩步法兩種。在一步法中戊二醛直接參加酶與抗體的混合物中,反應后即得酶符號抗體。 
    ELISA中常用的酶一般都用此法交聯。它具有操作簡潔、有效(結合率達60%-70%)和重復性好等優點。缺點是交聯反應是隨機的,酶與抗體交聯時分子間的份額不嚴格,結合物的巨細也不均一,酶與酶,抗體與抗體之間也有或許交聯,影響效果。兩步法的產品中絕大部分的酶與蛋白質是以1:1的份額結合的,較一步法的酶結合物更有助于本底的改進以提高敏感度,但其偶聯的有效率較一步法低。 
    (2)過碘酸鹽氧化法:本法只適用于含糖量較高的酶。辣根過氧化物酶的符號常用此法。反應時,過碘酸鈉將HRP分子外表的多糖氧化為醛基很活潑,可與蛋白質上的氨基構成Schiff氏堿而結合。
    按以上辦法制備的酶結合物一般都混有未結合物的酶和抗體。理論上,結合物中混有的游離酶一般不影響ELISA中zui后的酶活性測定,因通過*洗滌,游離酶可被除掉,并不影響顯色。但游離的抗體則不同,它會與酶標抗體競爭相應的固相抗原,從而減少了斷合到固相上的酶標抗體的量。

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