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    PCR常見術語

    發布時間: 2011-05-13  點擊次數: 2223次

    PCR常見術語

    1.矩陣形式代表什么?

    矩陣形式就是體外包裝的cDNA文庫以二維矩陣的形式進行排列組合,用于篩選特定的基因和片段。

    2.SM是什么意思?

    SM是“懸浮培養液”的縮寫。

    3.Ct 值的定義

    在熒光定量PCR技術中,有一個很重要的概念 -- Ct值。C代表Cycle,t代表threshold,Ct值的含義是:每個反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數

    4.什么是內參照法?

    在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板。   

    5.PCR-ELISA法:利用地高辛或生物素等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入抗地高辛或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,zui終酶使底物顯色。常規的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現定量檢測目的。
     

    6. 什么是競爭法?

    選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。   

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